實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

產品屬性：  

商品介紹：

冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

 PPT1 / Palmitoyl-protein thioesterase 1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 NRBF2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 INSL4 / EPIL 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 NKG2D / CD314 / KLRK1 CHO細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 M-CSF / CSF-1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 Cardiotrophin-1 / CTF1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/2/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

狗 CD40 / TNFRSF5 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

骨髓樹突狀細胞(DC細胞)2，3，4-三羥基苯甲酸 97%間氯 GR，99%Anti-LILRB3/CD85a/PirB  白球蛋白樣受體-B抗體

吖橙 電泳級間氯 分析標準品，用于環境分析，>99.6%(GC)Anti-LIX1  LIX1抗體

4-(2-氨乙基)苯磺酰氟鹽酸鹽 98%2,3-二氯 分析標準品Anti-Livin  凋亡抑制蛋白抗體

素D 98%（劇品）2,3-二氯 98%Anti-phospho-LKB1(Thr363)  化/蛋白激抗體

四氮唑藍 98%1,2,4-三氯苯 GR，99%Anti-phospho-LKB1(Ser334)  化/蛋白激抗體

赫斯特熒光燃料，33258 98%1,2,4-三氯苯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)Anti-phospho-LKB1(Ser428)  化/蛋白激抗體

赫斯特熒光燃料，33342 98%甲中1,2,4-三氯苯標樣 分析標準品Anti-Phospho-LKB1(Thr189)  化/蛋白激抗體

貝他定鹽酸 98%1,2,4-三氯苯 CP，96%Anti-LFABP/FABP-1  肝臟型脂肪酸結合蛋白抗體