細胞實驗步驟：

一、細胞復蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風30min；

2.預熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)瓶使細胞分布均勻，并做好標記；

13.在顯微鏡下觀察復蘇的細胞密度及狀態(tài)；

14.將細胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

L Wnt-3A細胞專用培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持L Wnt-3A細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含L Wnt-3A細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于L Wnt-3A細胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

DMEM 基礎培養(yǎng)基                                     445ml

特級胎牛血清                                         50 ml

注意事項：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細胞培養(yǎng)步驟：

?細胞復蘇?：

從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細胞傳代?：

當細胞長到80%~90%時，進行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當細胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細胞培養(yǎng)液重懸細胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補加新鮮培養(yǎng)基。

做好標記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細胞凍存?：

選擇對數(shù)生長期的細胞進行凍存。

將細胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。

將細胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠白介素6(IL-6)ELISA pcr檢測試劑盒

Rat heat shock protein 90 (HSP-90) ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白90(HSP-90)試劑盒

Humanierleukieceptorassociatedkinase,IRAKELISAKit 人白介素受體相關激酶(IRAK)pcr檢測試劑盒分裝

Humancalmodulin,CAM試劑盒人鈣調(diào)素(CAM)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染試劑盒20次

HumanSolubleLectin-likeoxidizedlowdensitylipoproteieceptor-1,sLOX-1ELISAKit人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)試劑盒 ，英文名： CDHE ELISA Kit

Mouse cardiac anscription factor GATA4 ELISA Kit 小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4 試劑盒

RatSomatostatin,SSELISAKit 大鼠(SS)pcr檢測試劑盒分裝

CLIAKitforHAMA(Humanaimousaibody)ELISA人抗鼠抗體

細胞半胱蛋白酶-6(CASPASE-6)活性比色法定量試劑盒20次

RatVitaminA,VAELISAKit大鼠A(VA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔子腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)試劑盒

兔子腦素/腦尿肽(BNP)試劑盒

兔子內(nèi)皮抑素(ES)試劑盒

兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)試劑盒

1號染色體開放閱讀框51抗體

大腦蛋白1抗體

KDR重組大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (Fc 標簽) Protein

Estradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgEstradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白

CDKL2重組人 CDKL2 蛋白 Protein

GDNF Protein Human 重組人 GDNF 蛋白

TNFRSF1B Protein Mouse 重組小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白

LWnt-3A 細胞專用培養(yǎng)基Estradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgEstradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白

GDNF Protein Human 重組人 GDNF 蛋白

KDR重組大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (Fc 標簽) Protein

TNFRSF1B Protein Mouse 重組小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白

CDKL2重組人 CDKL2 蛋白 Protein